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邻苯二甲醛是 国内外新研发的化学消毒剂 ，近 年来在消毒领域颇受关注 ，一些文献报道其消毒性 能优 良¨ J。本研究邻苯二 甲醛消毒剂 (武汉某企 业提供)是以邻苯二 甲醛为主要有效成分 ，辅助成 分有非离子表面活性剂和碱性调节剂的复方制剂 ， 其原 液 的邻 苯 二 甲醛 含 量 为 5．7g／L，pH 值 为 8．88。为观察该复方消毒剂消毒相关性能 ，我们在 实验条件下对其杀菌效果 、理化性能和动物毒性进 行了试验观察。现将观察结果报告如下。

1 方法 1．1 理化 性能 测定

1．1．1 含量测定 邻苯二 甲醛含量测定方法是按 该产品生产企业提供 的方法，取邻苯二 甲醛消毒剂 原液适量 ，用 0．25mol／L硫 酸标准液调节 pH值至 7．0作为供试品。精密量取邻苯二 甲醛消毒剂 中性 供试液 10．0ml，精密加盐酸羟胺 中性溶液 25ml，摇 匀静置 1h；精密加 6．5％三乙醇胺溶液 20ml，振摇 后用 0．25mol／L硫 酸标准液滴定 。空 白对 照试剂 为 pH值 6．0～7．0的蒸馏水。重复3次取其平均值 计算邻苯二甲醛含量。 1．1．2 稳定性试验 用加速试验法 ，将该邻苯二甲 醛消毒剂原液密封包装 ，一式 3份 ，置于 540(：温箱 存放 14d。于储存前后取样按上述方法测定邻苯二 甲醛含量，计算其下降率。 1．1．3 金 属腐蚀性试验 选 择直径 24．0mm，厚 1．0ram(中心有 2mm直径 的孔)4种金属圆片(碳钢、不锈钢 、铜 和铝 )，每个金 属片表面积总值约 为 9．80cm ，购 自中国疾病预防控制 中心环境所 消毒 检测中心。金属片均经过严格脱脂 、洗净 ，干燥至恒 重 ，每片精确称重。将该邻苯二甲醛消毒剂原液置 于带盖的玻璃缸 内，消毒剂量按 200ml／片进行浸泡 试验。浸泡至 72h后除去金属样片上腐蚀产物，彻 底清洗干净 ，干燥至恒重 ，精确称重，记录每片重量。 根据试验前后金属片重量差 ，得到每种金属片平均 损失重量，计算腐蚀率。试验 同时设蒸馏水浸泡不 锈钢片对照。 1．2 杀 菌试验 1．2．1 菌悬液和菌片制备 试验指标菌为枯草杆 菌黑色变种(ATCC9372)芽孢和大肠杆菌(8099)， 均由军事医学科学院消毒检测中心提供 。枯草杆菌 黑色变种经分离培养 ，取典型菌落接种 营养 肉汤作 增菌培养，然后用营养肉汤接种罗氏瓶 ，培养成芽孢 后，经收取 、断链 、灭活繁殖体、离心清洗 、芽孢计数 ， 配制成芽孢悬液。(TSB)稀释至所需浓度 ，用芽孢 悬液 0．02ml滴染于直径 12mm，厚 0．5mm灭菌不 锈钢载体片上 ，干燥制备成染菌载体 ，使回收菌数达 5×10cfu／片 ～5×10。cfu／片，备用。大肠杆菌取经 24h培养的新鲜斜 面培养物 ，先用含胰蛋 白胨生理 盐水稀释液 (TPS)洗下菌苔，稀释配制成含菌量为 1 ×10cfu／ml一5×10cfu／ml菌悬液 ，供能量试验用。 1．2．2 中和剂选择试验 用枯草杆菌黑色变种芽 胞和大肠杆菌为代表菌株 ，设计 6组，分别用载体定 量杀菌和悬液定量杀菌试验法进行 中和剂鉴定试 验。结果判定 ，以第 1组有极少量菌生长或无菌生 长；第 2组有菌生长且明显少于第 3、4、5组 ，但多于 第 1组 ；第 3、4、5组菌数接近且符合 阳性对照组菌 数要求 ，第 6组无菌生长。符合上述条件 ，试验重复 3次结果一致 ，判定所选中和剂及其浓度适宜。 1．2．3 载体浸泡定量杀 菌试 验 试验 在 19℃ ～ 21℃水浴中进行。先将邻苯二甲醛消毒剂原液按每 片 5．0ml加人灭 菌平皿 内(阳性对 照组用 TPS)。 置水浴 中预温 5min～10rain，加入染菌载体 ，作用 至预定时间后 ，将载体取出加人盛 5．0ml中和剂试 管中。中和作用 10min后，取样液接种无菌平皿 ， 一 式 2份 ，倾注用胰蛋 白胨大豆琼脂培养基，作活菌 计数培养 。试验重复 3次。 1．2．4 载体浸泡定性 杀菌试验 试 验在 l9℃ 一 21℃水浴中进行。先将邻苯二甲醛消毒剂原液按每 片 5．0ml加入灭 菌平皿 内(阳性 对照组用 TPS)。 置水浴中预温 5min一10min，加入载体 ，作用至预 定时间后 ，将载体取 出加入盛 5．0ml中和剂 TSB试 管中。另取出 2片 ，移入一含 10．0ml中和剂中，做活菌培养计数。试验组和阳性对照组均培养一周， 观察结果 。试验重复 5次。 1．3 医疗器械的消毒模拟现场试验 1．3．1 模拟消毒现场试验 载体为截断的医用止 血钳轴 至齿端部位 ，用无菌移液器将 0．02ml枯草 杆菌黑色变种芽孢悬液滴染于朝上的齿部并用无菌 L形铂金丝涂匀 ，置 37℃温箱内干燥后制成染菌载 体 。按每个载体 10ml用量将 30个染菌载体浸没 于邻苯二 甲醛消毒剂(阳性对照为 3个染菌载体浸 没于无菌蒸馏水 中)原液中进行消毒处理。在 19~C ～ 21qC水浴条件下 ，作用至规定时间，分别将载体取 出移人含 10ml中和剂溶 液的塑料试管 内振 荡摇 匀，取洗脱液或其稀释液作活菌培养计数。 1．3．2 模拟灭菌现场试验 取上述相同的 20个染 菌载体按每个载体 10ml用量浸没于邻苯二甲醛消 毒剂(阳性 对照为 2个 染菌 载体浸没 于标 准硬水 中)原液中，在 19~C～21℃水浴条件下 ，作用至规定 时间，分别将载体取 出移人含 10ml中和剂肉汤的 试管 内(共 20支)进 行定性培养 7d，观察 最终结 果。试验重复 3次。 另取 3个染菌载体分别放入相同用量的标准硬 水中，作用后将每个 载体移人含 l0ml中和剂溶液 的试管内振荡摇匀 ，取洗脱液或其稀释液作活菌培 养计数。 1．4 能量试验 吸取大肠杆菌新鲜菌悬液 6．0ml于无 菌试管 内，加入 4．0ml酵母液(用标准硬水将酵母 粉配成 的 50％溶液 )混匀，使 回收菌数达 10cfu／ml～10 cfu／ml，制成实验用 菌悬液 。将 待测邻苯二 甲醛消 毒剂用硬水稀 释成含 邻苯二 甲醛为 0．43％ (A)、 0．28％(B)、0．14％ (C)等 3个梯度浓度溶液 ，以每 管 3mL分别装于无菌试管内。按 2002年版《消毒 技术规范》能量试 验操作 时间表规定 的时 间和顺 序，分 3次每次加入 1．0ml菌悬液 ，混匀作用 8或 10rain，取混合液移种于 5支盛有 5ml含中和剂的 营养肉汤管中。每 131次 ，连续 3日重复 3次加菌 试验共 45支 试验 管 与 阳性 、阴性 对照组 一 同置 37~C培养 箱 中培 养 48h，观察 是否有菌 生长。按 《消毒技术规 范》规定 的标准 ，判定能量试验结果， 判定为最低合格浓度。 1．5 毒性试验 1．5．1 急性经 口毒性试验 取体重 18．0g一22．0 g清洁级昆明种小鼠20只(河南省实验动物 中心提 供 ，实 验 动 物 生 产 许 可证 号 SCXK(豫 )2005— 0001)，随机分为 2组 ，每组 1O只，雌雄各半。设定 剂量组 ，采用霍恩氏法 ，一次经口灌 胃给药。给药后连续观察 14d，记录小 鼠各种中毒表现及死亡情况， 计算 LD。值。 1．5．2 小 鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 取体重 25．0g一30．0g清洁级昆明种小鼠雌雄各 25只(动 物来源和许 可证号 同上 )，随机分为 5组 ，每组 10 只，雌雄各半。受试 物剂量分别 为 5000、2000、500 mg／kg体重 ，阳性对照为 40mg／kg体重环磷酰胺 ， 蒸馏水为阴性对照。采用经 口灌 胃30h染毒法 ，每 次灌胃量为 0．2ml／10g体重 ，间隔 24h灌 胃2次。 末次给样品后 6h颈椎脱 臼处死动物 ，取胸骨骨髓 用小牛血清稀释 涂片，甲醇 固定 ，Giemsa染 色。在 光学显微镜下 ，每 只动物计数 1000个 嗜多染红细 胞 ，观察含有微核 的嗜多染红细胞数 ，计算 微核率 (以千分率计)；计数 200个 嗜多染红 细胞 ，计算嗜 多染红细胞与成熟红细胞的比例 (PCE／NCE)。2 结果 2．1 理 化性 能试验 结果 经检测 ，该复方邻 苯二 甲醛消毒剂原液的邻苯 二 甲醛含量均值为 5．7g／L。该 产品密封包装储存 于54~C温箱 14d，邻苯二 甲醛含量均值为 5．2 L， 平均下降率为 8．72％(表 1)。

金属腐蚀性试验结果表 明，用该复方邻苯二甲 醛消毒剂原液浸泡不锈钢、碳钢、铝 、铜片 72h后 ， 对不锈 钢、碳 钢 、铝 、铜 的 腐 蚀 速 率 (R)依 次 为 0．0000、0．0414、0．0138、0．1079mm／a，依据腐蚀性 分级标准判定 ：对不锈钢基本无腐蚀 ，对铝 、碳钢有 轻度腐蚀 ，对铜有 中度腐蚀 。 2．2 中和剂选择试验结果 用含 l0 L甘氨酸 、50g／L吐温 80、3g／L卵磷 脂磷酸缓冲液组成 的中和剂，可有效 中和该复方邻 苯二甲醛消毒剂原液对枯草杆菌黑色变种芽孢和大 肠杆菌的残留作用 ，且 中和剂及 中和产物对受试菌 的生长和培养基均无不良影响，表明以上中和剂符 合要求(表 2)。 2．3 杀菌试验结果 2．3．1 载体浸泡定量杀菌试验结果 试验表明，含 5．7g／L邻苯二甲醛 的该消毒剂原液对载体上枯草 杆菌黑色变种芽孢作用 60min，平均杀灭对数值各次均大于 5．00(表 3)。 2．3．2 载体浸泡定性灭菌试验结果 结果表 明，用 该邻苯二甲醛的该消毒剂原液浸泡作用 120min，所 有投入试验样片的含中和剂 的肉汤管培养 7d均无 菌生长，阳性对照组均有菌生长 ，阳性对照回收菌数 对数值为 5．89～5．99，对细菌芽 孢达 到完全杀灭 (表 3)。

2．4 模 拟现 场 试验结 果 2．4．1 模拟消毒现场试验结果 医疗 器械的消毒 模拟现场试验结果表 明，用该复方邻苯二 甲醛的该 消毒剂原液对 30个染有枯草杆菌黑色变种芽孢 的 止血钳作用 60min，杀灭对数值各次均大于 3．0O。 2．4．2 模拟灭菌现场试验结果 结果表明，用该邻 苯二 甲醛的该消毒剂原液对 60个染有枯草杆菌黑 色变种芽孢的止血钳作用 120min，定性培养 7d，60 支含 中和剂的肉汤管均无菌生长 ，阳性对照管均有 菌生长 ，阳性对照回收菌数值为 1．80×10。cfu／样本 ～ 2．15×10cfu／样本 。 2．5 能量试 验 结果 连续 3次能量实验结果表 明，该消毒剂对大肠 杆菌的最低合格浓度为 2800mg／L邻苯二甲醛。 2．6 毒性试验结果 急性经 口毒性试验结果表明，该 复方邻苯二 甲 醛的该消毒剂对昆明种雌、雄性小 鼠 LD卯均大于 5000mg／kg体重 ，属实际无毒级物质。变种芽孢 的平 均杀 灭率为 96．03％ ；含 5000mg／L 邻苯二甲醛单组分 ，对枯草杆菌黑色变种芽孢作用 5min，平均杀灭率仅 87．37％。

3 讨 论 邻苯二 甲醛 (ortho—phthalaldehyde，OPA)分子 式为 CH 0 ，分子量为 134．13，成品为淡黄色针状 晶体，溶于水 、醇、醚等有机溶 剂。研究表 明，OPA 对细菌繁殖体、真菌 、分枝杆菌、病毒 、细菌芽孢都有 很强 的杀灭 作用 。OPA 作为 一种 高 效 消毒 剂在 1999年通过了美 国 FDA注册认证 j，该消毒剂 以 复方液体制剂在 国内也得到 国家卫生部注册。 关于邻苯二 甲醛类消毒剂杀菌试验等消毒相关 性能研究已有不少文献报道 J，都证明其是一种 广谱 、高效 、低腐蚀性 、低刺激性、使用浓度低的新型 消毒剂 。单组分 OPA对细菌芽孢的杀灭作用 比较 慢 ，需要经过复配以及调整其溶液的酸碱度 ，以提高其杀菌效率 。本研究通过将 OPA和癸 甲溴铵进行 复配发现 ，仅需加人少量 的双链季铵盐类 消毒剂 即 可明显提高其消毒效果 ，可以满足兽医临床上对细 菌芽孢的消毒要求。试验证 明，将本研究复方邻苯 二甲醛消毒剂原液稀释 8倍 ，对几种猪 源致病菌平 均杀灭率达到 99％左右 ，只需要稍微提高浓度或延 长作用时间，即可达到规定的消毒指标要求。本研 究结果 ，为 OPA用 于养殖领域消毒提供 了科学 依 据。 当前 ，国内外人畜共患病特别是人畜共患传染 病形势严峻，很多动物传染病都可能成为人传染病 发展源头 ，没有动物病原的有效控制和净化，人类就 很难控制和净化 自身。当前猪流感 、禽流感 、猪链球 菌等人畜共患病既对动物养殖造成了严重危害，也 严重威胁了人类的健康 ，因此研究复方 OPA消毒剂 控制动物源性疾病能提高动物养殖效益 ，同时对人 类 自身生存环境的净化具有重要 的现实意义。

参 考 文 献 [1] 薛广波．现代消毒学 [M]．北京 ：人 民军医 出版 社 ，2002：99～ l26． [2] 常文军 ，蔡全才 ，徐荷，等．邻苯二 甲醛消毒剂研究进展 [J]．中 国消毒学杂志 ，2004，21(1)：67． [3] 陈菁 ，许能锋．邻苯二甲醛消毒作用及其 机制[J]．国外医学流 行病学传染病学分册 ，2004，31(2)：121． [4] 林立旺 ，许能锋 ，陈菁 ，等．复方邻苯二 甲醛 的研 制及消毒性能 观察 [J]．中国消毒学杂志 ，2007，24(1)：21． [5] 黄育红 ，陈路遥 ，徐文体．邻 苯二 甲醛 与戊 二醛 杀菌效果 的比 较 [J]．中国消毒学杂志 ，2005，22(4)：416． (收稿 日期 ：2009—09—13)